Production de Macroarray

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Cette méthode consiste à déposer des milliers de clones de type BAC, EST sur une membrane de nylon 22*22 cm.

Grâce à notre station robotisée Q-Pix (Genetix), des schémas de dépôts de diverses densités peuvent être réalisés. Le robot piqueur utilise une tête comportant 96 ou 384 aiguilles qui prélève un aliquot de bactéries dans une plaque de culture et le dépose de façon ordonnée sur une membrane de nylon. Chaque plaque est déposée en duplicat, selon un motif particulier permettant d’identifier les coordonnées des clones positifs lors du criblage.

Selon vos besoins, il est possible de déposer les clones suivant différents patterns, de 2*2 (9 216 clones par filtre), 5*5 (27 648 clones) à 7*7 (55 296 clones par filtre).

Détails du Pattern 7x7 :

Avec ce schéma, le nombre de plaques spottées par membrane est optimisé et le criblage est beaucoup plus efficace : le temps de manipulation et la quantité de radioactivité nécessaire sont réduits au maximum.

 

macroarray production 7x7 pattern

La qualité de chaque lot de membranes est vérifiée après production par hybridation d’une sonde témoin ou vecteur (informations disponibles sur demande).

Les caractéristiques de la banque spottée, la description des schémas de dépôts et un protocole d’hybridation sont joints à toute distribution de membrane.

Applications :

Les macroarrays permettent l’hybridation de sondes marquées à chaud ou à froid, et sont réutilisables jusqu'à 5 fois. L'analyse des images d'hybridation par un logiciel dédié permet de repérer les coordonnées des clones portant une séquence d’intérêt.

  • Les filtres de banques BACs permettent d'identifier des gènes d'intérêt à partir d'informations de séquences issues d’espèces apparentées. Ils permettent également l’identification de gènes appartenant à une famille multigénique, la caractérisation de séquences particulières du génome...
  • Les filtres d'ADNc sont utilisés pour des études d'expression de gène

Équipement production macroarrays

Les clones BACs sont déposés sur des filtres haute densité par l’automate QPixIIXT.

L’ADN des clones BACs est fixé sur les filtres haute densité par un crosslinker.

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